螺旋藻粉中藻藍(lán)蛋白含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法研究
發(fā)表時(shí)間:2025-08-18螺旋藻粉中藻藍(lán)蛋白含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法主要有分光光度法,此外還有基于電泳技術(shù)的測(cè)定方法,以下是具體介紹:
分光光度法:《SN/T 1113-2002進(jìn)出口螺旋藻粉中藻藍(lán)蛋白、葉綠素含量的測(cè)定方法》規(guī)定了進(jìn)出口螺旋藻粉中藻藍(lán)蛋白含量檢驗(yàn)的抽樣、制樣和分光光度測(cè)定方法,該方法原理是樣品用磷酸鹽緩沖液溶解,置冰箱中冷凍、融解,使色素蛋白析出,分離后的提取液用分光光度法測(cè)定。具體操作是稱取試樣0.25g-0.5g,精確至0.0001g,用 0.1mol/L 磷酸二氫鉀溶液與0.1mol/L 磷酸氫二鉀溶液(45+55,V/V)混合而成的pH值為7.0的磷酸鹽緩沖液溶解,超聲振蕩5min,定容于250mL容量瓶中,搖勻,將溶液全部轉(zhuǎn)入250mL廣口塑料瓶,置于-20℃冰箱內(nèi)冷凍12h或放置過(guò)夜,取出解凍,搖勻。取部分溶液于離心管中,在3000r/min轉(zhuǎn)速下離心15min,取上層清液,用1cm比色皿,在分光光度計(jì)上分別測(cè)定620nm、652nm、562nm處的吸光度,用緩沖液做空白,再根據(jù)相應(yīng)公式計(jì)算出試樣中藻藍(lán)蛋白的質(zhì)量分?jǐn)?shù)含量。
電泳法:如一種通過(guò)亞基定性、定量螺旋藻中藻藍(lán)蛋白的方法,運(yùn)用十二烷基硫酸鈉聚丙酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)方法,通過(guò)考馬斯亮藍(lán)染色劑,將蛋白染色為可見(jiàn)條帶,依據(jù)藻藍(lán)蛋白α(分子量為21kDa)、β(分子量為14kDa)亞基條帶特征將藻藍(lán)蛋白與其他蛋白鑒別,凝膠成像系統(tǒng)分析藻藍(lán)蛋白α亞基條帶發(fā)光量與藻藍(lán)蛋白含量的線性關(guān)系,根據(jù)α亞基條帶體積計(jì)算藻藍(lán)蛋白含量。此方法不需分離純化藻藍(lán)蛋白,可以單一精準(zhǔn)測(cè)定其含量,相較于其他電泳定量方法,利用α亞基條帶體積作為參照條件,比條帶總體積為參照條件更加靈敏、準(zhǔn)確。
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